超敏型 ECL化學發光底物試劑盒

Super-sensitive Enhanced Chemiluminescence Substrate Kit

試劑盒組成：

儲存：避光保存，室溫可保持穩定兩年以上；長期不用，建議置于4 oC保存延長有效期。

一、產品簡介：

超敏型 ECL化學發光底物試劑盒是化學發光系統，也稱為超敏型ECL發光液，用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，檢測靈敏度可達高飛克(femtogram)級，適用于檢測痕量蛋白或核酸。發光信號持久，所采用的獨特配方足以維持6小時以上的發光，便于反復曝光操作。與普通 ECL 化學發光底物相比，可明顯減少一抗和二抗的使用量。

二、原理：

超敏型ECL化學發光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以HRP標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產品配制的ECL工作液中，室溫孵育數分鐘，HRP使工作液中的魯米諾（Luminol）氧化并發光，試劑中添加的增強劑可以使得這種發光大大增強。此光經X光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。

三、產品優點：

高飛克級靈敏度——高靈敏性，能快速檢測更廣泛的蛋白范圍，可檢測低達約300飛克的蛋白量。

信號穩定——發光時間長，能進行多次曝光，30min后仍可維持約90%的發光強度，6小時后仍能維持60%以上的發光強度。

信號強——發光信號比對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系更強。

穩定性高——試劑盒可在室溫長期穩定存放。

節約抗體——需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗，特別節省抗體(推薦用量：一抗0.02-1.0 μg/mL，二抗4-20 ng/mL)。

四、使用方法：

1. 印跡膜制備：執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發光底物，檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。

2. ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均勻并盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約1分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號顯現：

1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；

2). 將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；

3). 用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光；

4). 根據信號強弱適當調整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。

五、安全性：

無特殊毒性，按普通化學品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸，請立刻用大量清水沖洗。

六、注意事項：

1．由于不同品牌的抗體質量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進行優化，以取得更優效果。

2．勿將ECL化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下，否則會導致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。

3．使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。

4．使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑；

5．印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時發出的光最強，然后隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持90%的光信號，至24小時仍可保持約60%的光信號；蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間；使用過少的ECL工作液不利反應進行，為達節約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。

6．使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素，容易產生非特異性信號。

7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金屬氧化物顆?？赡軙斐赡ど铣霈F顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

9．疊氮化鈉（NaN3）能抑制HRP活性，應避免使用NaN3，如必須使用，濃度不要超過0.01%。

10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

11．本產品僅供研究使用。